Флокуляционный реагент FLOMAC (pDADMAC)
Доступные варианты
При работе с клеточными культурами высокой плотности наибольшую сложность представляют процедуры осветления и очистки. Значительное содержание твёрдых веществ с повышенной долей частиц размером менее 1 мкм не позволяет эффективно применять существующие методики для полного отделения твёрдых частиц от жидкой фазы.
Одним из методов преодоления данной проблемы является применение флокулянтов для очистки клеточной культуры. Полидиаллилдиметиламмоний хлорид (FLOMAC®), полимер, содержащий большое количество катионных групп, является весьма эффективным флокулянтом. Введение 0,01-0,05% FLOMAC® в поток клеточной культуры приводит к быстрому слипанию отрицательно заряженных клеток и их остатков с образованием крупных агрегатов за счёт взаимодействия противоположно заряженных ионов.
При обработке культуральной жидкости кислотами и полимерными флокулянтами происходит агрегирование частиц с увеличением их размера. Традиционные глубинные фильтры не предназначены для фильтрации обработанных культуральных жидкостей, содержащих частицы размером 20-60 мкм (в зависимости от типа реагента). Мы оптимизировали процесс осветления клеточной культуры за счет использования Flomac®, улучшающего отделение частиц, содержащихся в типичных обработанных культуральных жидкостях и повышающего эффективность фильтров на стадии осветления до уровня, недостижимого при применении только традиционных глубинных фильтров для первичного осветления.
Информация о продукте FLOMAC®
FLOMAC® представляет собой водорастворимый полимер, который широко применяют в качестве флокулянта при обработке сточных вод. Предлагаемые на рынке растворы полимера содержат значительное количество мономера и хлорида натрия и могут также характеризоваться высокой микробиологической нагрузкой.
Компания «Лаверна XXI век» разработала методику очистки, которая позволяет одновременно добиться содержания низкомолекулярного полимера и мономера менее 0,1% (см. рисунок 1) и полного удаления хлорида натрия. Стерилизующая фильтрация позволяет снизить число микроорганизмов до 10 КОЕ/мл и ниже. Процесс очистки разработан с учётом требований GMP.
Применение FLOMAC® для флокуляции
Наилучшие результаты при флокуляции обеспечивает добавка 0,01-0,05% FLOMAC®. Поскольку раствор имеет нейтральную реакцию среды, его применение требует лишь незначительной корректировки pH. После перемешивания в течение 15 минут наблюдается увеличение размера частиц. На рисунке 2 представлены диаграммы распределения размеров частиц в исходном растворе и в растворах после добавления FLOMAC® и обработки кислотой.
Удаление FLOMAC®
Исследования показывают, что остаточная концентрация FLOMAC® в растворе после полного цикла очистки не превышает 1 мг/кг. Токсикологические исследования растворов с указанной концентрацией не выявили цитотоксичности, острой системной токсичности, раздражающего (при внутрикожном введении) или гемолитического действия.
