Фильтрация культур клеток млекопитающих

Клетки млекопитающих культивируются разнообразными методами и в разных объемах для производства белков для терапевтических и диагностических применения. Клетки выращиваются в биореакторе или ферментере.

Первым этапом в процессе очистки является удаление целых клеток, клеточных осколков и частиц перед дальнейшими единичными операциями разделения. Используются как фильтрация в тангенциальном потоке (TFF), так и фильтрация в нормальном потоке (NFF, или тупиковая фильтрация). 

Выбор TFF или NFF для первого осветления зависит, в основном, от размера обрабатываемой партии и их количества в году. При малых объемах (партии меньше 1000 литров) или редких обработках, NFF обычно является лучшим выбором, поскольку стоимость одноразовых фильтров ниже, в сравнении с капитальными инвестициями в оборудование для TFF и затратами на валидацию многократного использования мембран. Обратно, TFF является более экономичным выбором для больших объемов и частых обработок, так что затраты на мембрану распределяются на очень большой объем производства.

(Примечание: дополнительную информацию можно найти в брошюре MILLIPORE «Mammalian Cell Culture Clarification», Lit. № A1511EN00) 

Цели разделения

Осветление/предфильтрация (первичная и вторичная стадии)

• удалить целые клетки, осколки клеток и частицы с высоким выходом и низкой стоимостью.

Стерилизующая фильтрация

• понизить биологическую нагрузку или стерилизовать перед дальнейшими этапами очистки потока.

Требования процесса

Благодаря высокой концентрации частиц и широкому распределению их размеров, трудно удалить все частицы одним этапом фильтрации. Во многих случаях распределение нагрузки от частиц на два или три последовательных этапа фильтрации является более экономичным методом. 

Рекомендации по фильтрам

• Первичное разделение удаляет целые клетки и осколки. Фильтры Prostak™ MF или глубинные фильтры Millistak+™ могут быть использованы для первичного удаления целых клеток и их осколков.
• Вторичная фильтрация (так называемая доочистка) снижает коллоидальную нагрузку на стерили-зующие фильтры или хроматографические колонки. Обычно глубинные фильтры Millistak+™ используются как промежуточный этап перед хромотографией или стерилизующей фильтрацией.
• Стерилизующая фильтрация используется перед хранением или прямой загрузкой в колонку. Стерилизующие фильтры используются, чтобы сохранить низкое количество бактерий и уменьшить в дальнейшем проблемы с пирогенами. Используются стерилизующие фильтры Durapore® 0,22 мкм.
• Для фильтрации воздуха наиболее часто используются фильтры Aervent™, гарантирующие стерильность и удаление вирусов.